王玲 韩岚岚 赵奎军**
东北农业大学农学院,黑龙江省 哈尔滨 150030
热休克蛋白HSP70(Heat Shock Protein 70 gene)是一种应激蛋白,具有分子伴侣、抗细胞凋亡、参与免疫反应、抗氧化及提高细胞对环境胁迫或伤害的耐受性等功能。对HSP70的研究,有助于揭示昆虫一些生命活动,及昆虫进化等方面的研究。本研究以大豆食心虫Leguminivora glycinivorella Matsumura 4龄幼虫虫体为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到大豆食心虫HSP70基因全长cDNA序列,共2305bp (Gene Bank 登录号为:JF793664),开放读码框 (open reading frame, ORF) 为1569bp,编码523个氨基酸,经ScanProsite软件分析发现HSP70家族的2个签名序列:IFDLGGGTFDVSIL(76~89残基)、IVLVGGSTRIPKVQK (213~227残基),属于HSP70的家族成员。以pET-21b为载体构建原核表达系统,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达57.3 kD的HSP70蛋白。
关键词 热休克蛋白HSP70;大豆食心虫;克隆;原核表达