杨小龙  唐尧  于志军  刘敬泽^*

河北师范大学生命科学学院  河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室  石家庄  050024）

   蜱类是陆生脊椎动物专性吸血、非永久性体外寄生虫，分布广泛，携带多种病原体，传播多种疾病，严重危害动物和人类的健康。近年来，从分子水平对蜱类功能因子进行研究，研发抗蜱疫苗已成为蜱类研究的热点领域。本研究重点在于对长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）、森林革蜱（Dermacentor silvarum）饱血因子基因的克隆、表达与功能分析，旨在对饱血因子基因的功能作进一步研究并且探索其在抗蜱疫苗方面的潜在应用价值。

本实验根据已报道的饱血因子基因序列，设计引物从两种硬蜱饱血雄蜱cDNA文库中分别扩增出其饱血因子基因HLEF和DSEF全长。并将其克隆到pET-32a载体中，转化到E.coli BL21感受态细胞中，在0.6mmol/L IPTG的诱导下进行表达，并对表达产物进行可溶性分析。大量表达蛋白经Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和纯化后，进行超滤脱盐复性。重组质粒pET-32aHLEF和pET-32aDSEF，经PCR扩增后在略小于500bp处均有特异性条带，大小与饱血因子基因分子量基本相符，测序结果亦表明基因插入无误，表达载体均构建成功。SDS-PAGE结果表明，重组载体pET-32aHLEF和pET-32aDSEF均能在原核表达系统中高效表达，并在37kDa处有一明显条带，与预期融合蛋白大小一致。可溶性分析表明，重组蛋白绝大部分以包涵体的形式存在。表达产物用6mol/L尿素溶解，经Ni Sepharose 6 Fast Flow纯化后，得到单一条带的高纯度蛋白。

本结果对两种硬蜱的饱血因子基因在原核表达系统进行了成功表达，并在纯化后得到高纯度的表达产物，为后续饱血因子的功能分析、Western blot检测和抗蜱疫苗研制奠定了基础。